WB 실험이란 무엇인가요?

WB 실험은 혼합된 단백질 시료를 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(PAGE)을 통해 분리한 후 특수 사이펀이나 전기장 장치를 사용하여 고체상 매질(예: PVDF 멤브레인)에 블로팅한 다음, 고체상 담체를 사용하여 단백질이나 펩타이드가 항원 역할을 합니다.

해당하는 1차 항체에 특이적으로 결합한 뒤, 효소나 동위원소 표지된 2차 항체와 결합해 최종적으로 기질 발색이나 방사선 촬영을 통해 특정 표적 유전자의 발현을 검출하는 방식이다.

wb 실험 원리 및 흐름도는 다음과 같습니다.

단백질 샘플 준비:

원래 샘플은 세포, 조직, 배양 상등액, 면역침전 또는 친화성 정제 단백질의 경우, 표적 단백질의 정성 검출을 위한 세포 시료의 처리 방법은 다음과 같습니다. 나머지 시료 준비 방법은 관련 문헌을 참조하시기 바랍니다.

참고:

1. 1분 후에 두 가지 시약 A와 B를 동일한 양으로 혼합하고, 막 단백질 면을 혼합물과 완전히 접촉시킵니다. 1분 후 필름을 다른 비닐랩으로 옮기고 남은 액을 제거한 후 잘 감싸서 엑스레이 필름 홀더에 담습니다.

2. 암실에서 현상액과 정착액을 각각 1×씩 플라스틱 트레이에 붓고, X선 필름을 붉은 빛 아래에서 꺼내어 적당한 크기(필름보다 길다)로 자른다. 종이 절단기는 너비와 너비가 모두 1cm 더 커야 합니다.

엑스레이 필름 홀더를 열고 엑스레이 필름을 필름 위에 올려놓으면 이동할 수 없습니다. 엑스레이 필름 홀더를 닫고 노출 시간을 적절하게 조정하세요. 신호의 강도에 따라 시간은 일반적으로 1분 또는 5분입니다. 최상의 효과를 얻으려면 여러 번 필름을 누르도록 선택할 수도 있습니다. X-Ray 필름을 꺼내 현상액에 빠르게 담그고 밴드가 나타난 직후 현상 중지가 나타날 때까지 기다리세요.

현상 시간은 일반적으로 1~2분(20~25°C)입니다. 온도가 너무 낮은 경우(16°C 미만) 현상 후 현상 시간을 적절하게 연장해야 합니다. 즉시 X선 필름을 정착액에 담그십시오. 정착 시간은 일반적으로 필름이 투명해질 때까지 5~10분입니다. 남은 정착액을 수돗물로 헹구고 실온에서 건조시키십시오.