전체 게놈 증폭 방법 요약

WGA(Whole Genome Amplification) 기술은 전체 게놈을 증폭하여 분석용 샘플을 대량으로 제공할 수 있습니다.

다중 어닐링 순환주기 증폭 증폭 기술(다중 어닐링 및 루프 기반 증폭) Cycles, MALBAC)은 MDA 방식과 PCR 방식의 특징을 결합한 35 nt 길이의 프라이머를 사용하며, 이는 고정된 27 nt 범용 프라이머 서열과 8 nt 랜덤 염기 서열인 8 nt 랜덤 염기 서열(N8)로 구성됩니다. 서열은 0°C에서 주형에 임의로 어닐링될 수 있습니다. 기울기 온도를 65°C로 올린 후 가닥 치환 활성을 갖는 Bst 대형 단편 DNA 중합효소의 작용으로 가닥 치환 중합 반응이 일어나고 일련의 길이는 다음과 같습니다. 94°C에서 변성, 0°C에서 어닐링, 65°C에서 확장 후 서로 다른(0.5-1.5kb) 세미앰플리콘을 얻었습니다. 이전 주기의 세미앰플리콘은 전체 앰플리콘의 양쪽 끝(27nt)에서 상보적인 구조를 형성했습니다. (Amplicons), 그런 다음 온도를 58°C로 낮추어 생성된 앰플리콘의 두 끝이 상보적이 되도록 하여 루프 구조를 형성함으로써 프라이머 조합으로 인한 전체 앰플리콘의 이중화로 인한 불균일한 증폭을 방지합니다. 이 사이클에서는 선형 증폭이 ​​발생하는 것이 대부분 보장됩니다. 위에서 설명한 대로 5번의 유사한 선형 증폭 주기 후에는 다수의 전체 앰플리콘을 얻을 수 있으며 후속 PCR 반응을 위한 주형으로 사용할 수 있습니다. 지수 PCR 반응에는 27nt 범용 프라이머가 사용되므로 전체 앰플리콘만 효과적으로 증폭될 수 있습니다. 증폭을 통해 전체 게놈의 효율적이고 균형 잡힌 증폭 달성

Xie Xiaoliang 교수는 Science에 향상된 단일 세포 WGA 방법인 트랜스포존 삽입을 통한 선형 증폭을 보고했습니다. DNA는 T7 프로모터를 포함하는 Tn5 트랜스포존에 의해 무작위로 단편화되어 선형 증폭이 ​​가능합니다. LIANTI 방법은 기존 방법보다 우수하며 킬로베이스 해상도에서 마이크로-CNV를 감지할 수 있습니다. 이를 통해 세포 간 DNA 복제의 다양하고 무작위로 발생하는 시작을 직접 관찰할 수 있습니다.

1. Pan Xiaoming, Liang Xingguo. 전체 게놈 증폭 기술의 원리 및 연구 진행 [J], 2014(12): 47-54.