수질 검사 지표로 대장균을 선택하는 이유는 무엇인가요?
대장균 검출 지표 및 방법
대장균 검출 원리:
대장균군은 유당을 발효하고 산과 가스를 생성할 수 있는 박테리아 그룹입니다. , 산소를 필요로 하는 통성혐기성 그람음성간균은 주로 사람과 동물의 분변에서 유래하므로 식품의 위생적 품질을 평가하고 장내 오염 가능성을 추론하는 분변 오염 지표로 사용됩니다. 식품 내 병원성 박테리아 수는 검체 100ml(g)에 포함된 대장균군 수(MPN)로 표시됩니다.
2. 필수 장비 및 기구:
2.1 항온 배양기: 36±1℃
2.2 1000ml 삼각 플라스크, 1ml, 10ml 피펫
2.4 현미경. >
2.5 매우 깨끗한 작업대
2.6 유리 슬라이드, 알코올 램프, 귀 청소 볼, 테스트 튜브 랙
2.7 저울: 감도 0.01g.
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2.8 멸균 주전자
2.9 페트리 접시(직경 90mm) 및 시험관, 121°C에서 30분간 멸균. 클램프 및 알코올 램프, 스톱워치, 슬라이드 3. 배양 배지 및 시약:
3.1 유당 담즙염 발효 튜브: 제조업체의 지침에 따라 준비하고 멸균합니다.
3.2 Eosin Melan Agar 플레이트. : 제조사의 지시에 따라 준비하고 소독하세요.
3.3 유당 발효 튜브: 제조사의 지시에 따라 준비하고 소독하세요.
3.4 그람염색액
3.4.1 크리스탈 바이올렛 염색액:
크리스탈 바이올렛 1g
95% 에탄올 20ml
1% 옥살산암모늄 수용액 80ml
크리스탈 바이올렛을 에탄올에 녹인 후 옥살산암모늄 용액과 섞습니다.
3.4.2 그람의 요오드 용액:
요오드 1g
요오드화칼륨 2g
증류수 300ml
먼저 요오드와 요오드화칼륨을 섞은 뒤 증류수를 조금 넣고 잘 흔들어 준 뒤 완전히 녹인 뒤 증류수를 300ml에 넣는다.
3.4. 3 샌드 옐로우 대비염색 용액:
샌드 옐로우 0.25g
95% 에탄올 10ml
증류수 90ml
샌드 옐로우를
3.5 생리식염수로 희석한 후
4. 검사순서 :
시험샘플
↓
희석
↓
유당 담즙염 발효관, 36±1℃, 24±2hr
↓ ↓
가스를 발생시키지 않고 가스를 발생시킨다
↓ ↓
대장균군 음성 에오신-메틸렌블루 한천배지, 36±1℃, 24±2hr
↓
보고서 ↓ ↓
그람 염색된 유당 발효관, 36±1℃, 24±2hr
↓
↓ ↓ ↓ ↓
G+ G-, 비바실러스 가스 생산
↓ ↓
대장균 음성 대장균 음성
↓ ↓ ↓
대장균 양성 보고
4. 판정 방법:
4.1 검체 희석:
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4.1.1 무균 작업을 통해 샘플 25ml(또는 25g)를 멸균된 생리 식염수 225ml가 들어 있는 멸균된 플라스틱 비이커에 넣고 잘 흔들어 1:10으로 균일하게 희석합니다.
4.1.2 1:1 드로잉용 멸균 빨대 1ml
0으로 희석한 후, 멸균된 생리식염수 9ml가 담긴 시험관에 주입하고 흔들어서 1:100으로 만든다.
4.1.3 5.1.2의 조작을 반복하여 1:1000으로 한다.
4.2 유당 및 담즙염 발효시험 : 식품위생기준의 요구사항 또는 시험검체의 오염도 평가에 따라 2개의 희석액을 선택하고, 각 희석액에 대해 3개의 튜브를 접종한다. 접종량이 1 ml 이상인 경우에는 유당 및 담즙염 발효관을 사용하고, 1 ml 이하인 경우에는 단일재료 유당 및 담즙염 발효관을 사용하여 36±1 ℃ 배양기에 넣는다. p>
모든 유당담즙염과 같이 24±2시간 동안 배양하여 소금발효관에서 가스가 발생하지 않으면 대장균군으로 보고할 수 있다.
가스발생이 있으면 음성이다.
4.3 분리 및 배양: 제품 가스가 담긴 발효 튜브를 에오신-멜란 한천 플레이트에 접종하고 36±1°C 인큐베이터에 놓고 24시간 동안 배양했습니다.
4.4 확인시험 : 위의 플레이트에서 그람염색이 의심되는 대장균군 집락을 1~2개 골라 유당발효관에 접종한다. 36±1℃ 배양기에서 24±2시간 동안 가스 생성을 관찰한다. 그람 염색 음성인 가스 생성 비세균은 대장균군 양성으로 보고될 수 있다.
4.5 보고: 대장균군 양성으로 확인된 튜브 수에 대해 MPN 검색표를 확인하고 100ml(g)당 가장 가능성이 높은 대장균군 수를 보고하세요.