대장균, 살모넬라, 포도상구균, 파스퇴렐라 등의 실험적 검출에 일반적으로 사용되는 방법과 장비는 무엇입니까?

대장균

시험용액 10ml(시험약품의 1g, 1ml, 10cm2에 해당)를 취하여 직접 또는 처리 후 적당량(이하 담즙염유당 배양배지 100ml에 18~24시간 동안 배양하며 필요에 따라 48시간까지 연장할 수 있다.

위 배양액 0.2ml를 취하여 MUG 배양액 5ml가 담긴 시험관에 접종하여 배양한 후 366nm 자외선 하에서 5시간, 24시간 관찰한 후 무접종 MUG 배양액을 사용한다 배경 제어로. 튜브의 배양물에 형광이 나타나면 MUG 양성이고, 형광이 없으면 MUG 음성입니다. 관찰 후 인디고 매트릭스 시험액 몇 방울을 배양관 벽을 따라 첨가하여 액체 표면이 붉은색으로 변하면 인디고 매트릭스 양성, 시약의 본래 색을 나타내면 인디고 매트릭스 음성이다. 배경 대조물질은 MUG 음성이어야 하고 인디고 매트릭스 음성이어야 합니다.

MUG가 양성이고 인디고 매트릭스가 양성이면 시험제품은 대장균을 검출한 것으로 판단하고, MUG가 음성이고 인디고 매트릭스가 음성이면 시험제품으로 판단한다. MUG가 양성인 경우, 또는 MUG가 음성이고 인디고 기질이 양성인 경우에는 담즙염 유당 배지를 도말하여 접종하여야 한다. eosin mylene blue agar media 또는 MacConkey agar media에 넣고 18~24시간 동안 배양한다.

플레이트 위에 콜로니가 자라지 않거나, 자란 콜로니가 표 1에 기재된 콜로니의 형태적 특성과 일치하지 않는 경우에는 시험제품에서 대장균이 검출되지 않는 것으로 판정한다. 플레이트에서 자라는 콜로니가 표 1에 나열된 콜로니의 형태학적 특성과 일치하거나 의심스러울 경우 분리, 정제, 염색 현미경 검사 및 적절한 생화학적 시험을 실시하여 대장균인지 확인해야 합니다.

표 1 대장균 집락 형태적 특성

중간 집락 형태

에오신 메틸렌 블루 한천은 청흑색, 연한 보라색, 청자색 또는 분홍색을 나타내며, 집락의 중심은 짙은 보라색이거나 눈에 띄지 않는 어두운 중심, 둥글고 약간 융기되어 있으며 깔끔한 가장자리, 매끄럽고 촉촉한 표면, 종종 금속 광택이 있음

MacConkey 한천, 밝은 분홍색 또는 붉은색, 집락의 중심 짙은 분홍색, 둥글고 편평하며 가장자리가 깔끔하고 매끄럽고 촉촉한 표면

살모넬라(Salmonella)

시험 샘플 10g 또는 10ml를 직접 또는 처리 후 채취합니다. 영양육배지 적당량(200ml 이상)을 넣고 호모지나이저나 기타 적당한 방법으로 혼합하여 18~24시간 배양한다.

위 배양액 1ml를 취해 10ml의 사티오황산나트륨 밝은 녹색배지에 접종하고 18~24시간 배양한 후 담즙유황한천(또는 살모넬라 또는 시겔라)에 접종한다. 배지 및 MacConkey 한천(또는 eosin mylene blue agar) 배지 플레이트에서 18~24시간 동안 배양합니다(필요한 경우 40~48시간 연장). 만약 플레이트 위에 콜로니가 자라지 않거나, 자라는 콜로니가 표 4에 기재된 것과 다른 특성을 나타낼 경우에는 시험제품에서 살모넬라균이 검출되지 않은 것으로 판정한다.

플레이트에서 자라는 콜로니가 표 4에 나열된 콜로니의 형태적 특성과 일치하거나 의심스러울 경우 접종바늘을 사용하여 2~3개의 콜로니를 선별하여 고층 경사면에 접종한다. 삼중당철한천배지에 천공하여 18~24시간 동안 배양한다. 사면에 붉은색이 보이지 않고 밑면에 노란색이 없으면, 사면이 노란색이고 밑면에 검은색이 없으면, 시험제품에서는 살모넬라균이 검출되지 않은 것으로 판단됩니다. 그렇지 않은 경우에는 삼중당철한천배지의 경사배양물을 채취하여 적절한 생화학적 시험과 혈청응집시험을 실시하여 살모넬라균인지를 확인하여야 한다.

표 4 살모넬라 집락의 형태적 특성

중간 집락 형태

담즙염 유황 한천은 무색 내지 연한 주황색, 반투명하고 집락 중앙에 검은색이 있거나 모두 검정색이거나 검정색이 아님

Salmonella 및 Shigella 한천은 무색에서 밝은 빨간색, 반투명 또는 불투명하며, 집락의 중심은 때때로 어두운 갈색입니다.

Eosin Mylene Blue Agar 무색에서 밝은색 주황색, 투명 또는 반투명, 부드럽고 촉촉한 둥근 집락

MacConkey Agar 무색 내지 연한 주황색, 투명 또는 반투명, 집락의 중심은 때때로 어둡습니다.

황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

시험용액 10ml(시험제품 1g, 1ml, 10cm2에 해당)를 취하여 직접 또는 처리한 후 적절한 접종물에 접종한다. 양 (적어도 100ml) 아황산 나트륨 (칼륨) 국물 (또는 영양 국물) 배지에서 18 ~ 24 시간 동안 배양하고 필요한 경우 48 시간까지 연장 할 수 있습니다. 상기 배양액을 취하여 난황염화나트륨한천배지 또는 만니톨염화나트륨한천배지의 플레이트에 획선으로 접종하고 24~72시간 배양한다. 플레이트에 콜로니가 자라지 않거나, 자란 콜로니가 표 5에 기재된 특성과 다를 경우에는 검체에서 황색포도상구균이 검출되지 않는 것으로 판단한다.

표 5 황색포도상구균 집락의 형태적 특성

중간 집락의 형태

만니톨산화나트륨한천 황금색을 띤 노란색으로 둥글고 볼록하며 깔끔한 모서리, 노란색이 있음 난황 염화나트륨 한천은 황황색으로 둥글고 볼록하며 가장자리가 깔끔하며, 집락의 직경은 0.7~1mm이며, 표면에는 레시틴이 분해되어 불투명한 고리가 있다.

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플레이트에서 자라는 콜로니가 표 5, 2~3에 나열된 콜로니의 특성과 일치하거나 의심되는 경우 콜로니를 선별하여 영양한천배지의 경사면에 접종하고 18~24시간 배양한다. 그람염색용 영양한천배지에서 배양물을 채취하여 영양배지에 접종한 후 혈장응고효소검사로 18~24시간 배양한다.

혈장 응고효소 시험: 멸균된 작은 시험관 3개를 취하여 혈장과 멸균수 혼합액(1:1)을 각각 0.5ml씩 첨가한 후 응고성 균주의 영양액 배양액(또는 제조된 농축세균현탁액)을 첨가한다. 영양한천배지 경사배양액) 0.5ml, 황색포도상구균 영양배지배양물(또는 영양한천배지 경사배양물로부터 제조한 농축세균현탁액) 0.5ml, 영양배지 또는 시험관인 0.9% 멸균염화나트륨용액 0.5ml, 양성 대조군 튜브와 음성 대조군 튜브. 3개의 튜브를 동시에 배양하였고, 3시간 이후부터 관찰을 시작하여 24시간까지 관찰하였다. 음성 대조 튜브의 혈장은 자유롭게 흘러야 하며, 양성 대조 튜브의 혈장은 응고되어야 합니다. 시험관의 혈장이 응고되면 혈장 응고효소 검사는 양성이고, 그렇지 않으면 음성입니다. 양성대조군이나 음성대조군이 요구사항을 충족하지 못하는 경우, 또 다른 혈장을 준비하고 시험을 반복해야 합니다.

위 의심균이 비그람양성 구균이고 혈장응고효소 검사가 음성인 경우에는 검사 검체에서 황색포도상구균이 검출되지 않습니다.