단백질 함량 모니터링

단백질 함량을 측정하는 방법에는 크게 킬달법, 뷰렛법, 자외선 흡수법, 페놀 시약법, 쿠마시 브릴리언트 블루법 등 5가지가 있습니다.

1. 킬달 질소 측정 방법:

단백질은 질소 함유 화합물입니다. 음식을 가열하고 농축된 황산과 촉매로 소화하여 생성된 암모니아가 황산과 결합하여 황산암모늄을 형성한 후, 이를 흡수한 후 알칼리를 첨가하여 암모니아를 제거합니다. 붕산은 염산과 함께 표준으로 사용됩니다. 용액 적정의 경우 단백질 전환 계수에 산 소비량을 곱하여 단백질 함량을 얻습니다. 식품에는 단백질 외에도 다른 질소 함유 물질도 포함되어 있으므로 이 단백질을 조단백질이라고 합니다.

2. 뷰렛 질소 측정 방법:

강알칼리성 용액에서 뷰렛과 CuSO4는 보라색 착물을 형성하는데, 이를 뷰렛 반응이라고 합니다. 2개의 아미드 기나 2개의 직접 연결된 펩타이드 결합, 또는 중간 탄소 원자를 통해 연결될 수 있는 펩타이드 결합을 가진 모든 화합물은 뷰렛 반응을 합니다. 보라색 복합체의 색상은 단백질 농도에 직접적으로 비례하며 단백질 분자량 및 아미노산 조성과는 아무런 관련이 없으므로 단백질 함량을 결정하는 데 사용할 수 있습니다. 측정 범위는 1~10mg 단백질입니다. 이 측정을 방해하는 주요 물질로는 황산암모늄, 트리스 완충액 및 특정 아미노산이 있습니다.

3. 자외선 흡수 질소 측정 방법:

단백질 분자에서 티로신, 페닐알라닌 및 트립토판 잔기의 벤젠 고리에는 ***-공액 이중 결합이 포함되어 있습니다. 자외선을 흡수하는 성질. 형성되는 색상 생성물의 양은 단백질의 농도에 따라 달라집니다. 실제 측정 시에는 단백질 표준액으로 미리 표준검량선을 작성해야 하며, 일반적으로 단백질 표준액으로는 소혈청알부민 수용액을 사용한다.

다양한 농도의 단백질 표준용액에 뷰렛 시약을 첨가한 후, 반응에 의해 생성된 발색물질의 흡광도를 뷰렛 시약과 완충액 또는 물을 사용하여 UV-가시광선 분광광도계로 파장 540nm에서 측정합니다. 빈 대비로. 그런 다음 측정된 값을 단백질 농도(mg/ml)에 대해 플롯하여 표준 곡선을 얻었습니다.

뷰렛 시약을 사용하여 미지의 단백질 샘플을 동일한 방법으로 처리하고, 측정된 흡광도 값을 표준곡선에서 바탕으로 미지의 단백질 샘플 내 단백질 농도를 직접 확인합니다. UV 흡수법으로 측정할 경우, pH 변화에 따라 단백질 흡수 피크가 변하는 경우가 많기 때문에, 시료 측정 시의 pH는 표준곡선의 pH와 일치해야 합니다.

4. 페놀 시약법:

이 방법의 발색 원리는 두 번째 시약인 폴린-페놀 시약을 첨가한다는 점을 제외하면 뷰렛법과 동일합니다. 발색 정도를 조절하여 단백질 검출 감도를 향상시킵니다. 이 두 가지 색상 반응이 진한 파란색을 생성하는 이유는 다음과 같습니다.

① 알칼리성 조건에서 단백질의 펩타이드 결합이 구리와 결합하여 복합체를 형성합니다.

②페놀 시약에 포함된 폴린-포스포몰리브데이트-포스포텅스테이트는 단백질의 티로신과 페닐알라닌 잔기에 의해 환원되어 진한 파란색(몰리브덴 블루와 텅스텐 블루의 혼합물)을 생성합니다. 특정 조건에서 파란색 깊이는 단백질 양에 비례합니다.

5. 쿠마시 브릴리언트 블루 방법:

쿠마시 브릴리언트 블루 G-250 염료는 산성 용액에서 단백질과 결합하여 염료의 최대 흡수 피크 위치(λmax) 465nm에서 595nm로 바뀌면서 결정되며, 용액의 색깔도 갈색-검정색에서 파란색으로 변했다. 연구에 따르면 염료는 주로 단백질의 기본 아미노산(특히 아르기닌) 및 방향족 아미노산 잔기와 결합됩니다. 595nm에서 측정된 흡광도 값 A595는 단백질 농도에 정비례합니다.

확장 정보

검사 과정

(1) 표준 곡선 작성을 위한 표준 방법: 14개의 시험관을 두 그룹으로 나누고 지침에 따라 병렬로 작동합니다. 테이블 A로 표준 곡선 그리기: A595nm를 세로축으로, 표준 단백질 함량을 가로축으로 하여 그래프 용지에 표준 곡선을 그립니다.

(2) 미세 방법으로 표준 곡선을 작성합니다. 12개의 시험관을 두 그룹으로 나누고 표 b에 따라 병렬로 작동합니다. 표준 곡선 그리기: A595nm를 세로 좌표로, 표준 단백질 함량을 가로 좌표로 사용하여 그래프 용지에 표준 곡선을 그립니다.

(3) 미지 시료 단백질 농도 측정: 측정 방법은 위와 동일하며, 측정값이 표준 곡선의 직선 범위 내에 있도록 적절한 미지 시료량을 채취합니다.

측정된 A595nm 값에 따라 표준곡선에서 표준단백질과 동등한 양을 찾아 미지 시료의 단백질 농도(mg/ml)를 계산합니다.

참고 자료 Baidu Encyclopedia - 단백질 함량 측정